液相色谱串联质谱技术定量检测的临床应用

      质谱（massspectrometry，MS）技术是一种重要的检测分析技术，通过将待测样本转换成高速运动的离子，根据不同的离子拥有不同的质荷比（m/z）进行分离和检测目标离子或片段，然后依据保留时间和其丰度值进行定性和定量检测。

色谱分析是一种对混合物进行分离的技术，根据相互作用类型的不同，色谱法又分为吸附色谱法、分配色谱法、离子交换色谱法、尺寸排阻色谱法和亲和色谱法，用的最多的为分配色谱法。

液相色谱（LC）因其流动相为液体而得名，液相色谱‐质谱仪（LC‐MS）是将色谱的高效分离能力和质谱的高特异性、高灵敏度相结合的分离分析技术。同时，为了获得未知化合物的结构信息和增加分析的选择性，往往采用串联质谱法（质谱‐质谱联用，MS/MS）。

LC‐MS/MS技术以其高灵敏度、低检测限、样本用量少、高通量、检测速度快的优势显示出巨大的生命力。LC‐MS/MS技术可以分析气相色谱‐质谱仪（GS‐MS）无法分析的极性、低挥发性或蛋白类样本，在临床中有更广泛的应用及前景。

类固醇激素是由胆固醇经一系列酶催化而来，主要由肾上腺、胎盘和生殖腺产生，根据其具体的功能可分为雄激素、雌激素、孕激素、糖皮质激素和盐皮质激素等。类固醇激素的水平检测在临床上具有重要意义，可用于类固醇相关障碍性疾病、先天性肾上腺皮质增生症、肾上腺功能异常（如Cushing综合征）的诊断、监测、治疗和研究等。

但类固醇激素具有结构类似物多，浓度水平低且跨度大等特点，给临床检测带来了巨大挑战。目前临床类固醇类激素的定量方法多基于免疫测定的分析方法，最常用的方法为化学发光免疫分析法，该方法灵敏，可自动化分析，但特异性较差，容易造成检测结果的假阳性或假阴性。

高特异性、高灵敏度和可同步检测多种目标分析物的特性使得LC‐MS/MS技术在类固醇激素检测发挥着其他方法不可替代的作用。目前，LC‐MS/MS技术已广泛应用于临床类固醇激素的检测，针对的临床样本有血清、血浆、干血片和微量末梢血等。

维生素（Vit）主要为脂溶性的维生素A、D、E、K和水溶性的B族及维生素C，其中维生素D的临床应用最多，主要是监测营养状态。

临床实验室检测维生素的方法主要为分光光度法，色谱法、荧光法，电化学发光法和ELISA法，基于不同原理的检测方法之间结果存在较大差异。LC‐MS/MS技术具有高灵敏度和高特异性的特点，可同时测定25‐OHD2，25‐OHD3以及25‐OHD3的差向异构体3‐epi25‐OHD3，解决了传统免疫方法特异性低等问题，提高了检测结果的准确性，被视为维生素D检测的“金标准”。

LC‐MS/MS技术相较于传统免疫方法检测变异度更少，可对不同基质中多种维生素进行准确、可靠的检测，对于更精准的评估人体维生素水平、诊断以及合理使用维生素补充制剂至关重要。

自动化免疫方法操作简便，经济，无需样本前处理，是很多临床实验室进行治疗药物监测（TDM）的常规方法，但由于该方法无法区分结构类似物，尤其是无活性代谢物的干扰，常常导致假性结果，对临床诊疗产生很大误导。

LC‐MS/MS相较于免疫分析方法通量、灵敏度和特异性更高，且样本需要量很少，可用干血片采样，患者可在家中采样后邮寄样本，非常便利。LC‐MS/MS技术在药物浓度监测方面的独到优势，正逐步替代免疫检测方法，成为临床实验室检测方法的首选。

目前LC‐MS/MS在TDM的应用几乎包括了所有需要监测的药物，如免疫抑制药物、精神类药物、抗肿瘤药物、抗真菌药物、核苷类抗病毒药、滥用药物、抗心律失常药物及一些代谢产物的同时检测等。

LC‐MS/MS方法比免疫分析方法的灵活性更高，临床实验室可以根据自己需要建立相应的检测方法，在样本量较大时，LC‐MS/MS的单个样本的检测成本更低，效益更高。

LC‐MS/MS技术在生化代谢小分子的应用主要有尿素、肌酐、尿酸、葡萄糖等，由于这些代谢小分子血清/血浆浓度相对较高，生化分析仪作为常规检测仪器更具优势，LC‐MS/MS方法主要用于临床实验室参考方法和参考物质的研制。

此外LC‐MS/MS技术用于各级胆汁酸（胆汁酸谱）的检测具有很大优势，可同步检测血清中21种初级和次级胆汁酸，对于新生儿肝内胆汁淤积症、胆道闭锁和坏死性小肠结肠炎以及妊娠期胆汁淤积的早期无创诊断具有很大优势。

1997年国际物质的量咨询委员会将同位素稀释质谱、精密库伦、电位滴定、凝固点下降法和重量法原理定为一级（基准）测量原理，即具有绝对测量性质。其中ID‐MS法是唯一一种微量、痕量和超痕量元素权威测量方法，其同时具有质谱分析的高度特异性和同位素稀释的高度精密性，且测量的动态范围宽，样本制备不需严格定量操作，测量值能够直接溯源到国际单位制物质的量基本单位“摩尔”。因此基于同位素稀释质谱原理的方法在生物和临床化学溯源研究中受到越来越多的重视，为临床检验中标准物质的研制提供了技术保障，是临床检验参考方法的最佳选择。